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VALIDATION CHU TIVOLI
Evaluation du test Immuno-chromatographique Lab On Time pour la détection des IgG et IgM anti Sars-Cov2 en comparaison avec l’Elisa IgG et IgA de EuroImmun
Ph. Biol. Annick Ocmant, Dr Jonathan Brauner, CHU Tivoli
Introduction
Les tests sérologiques vis à vis du SARS-CoV-2 (COVID19) permettent de déterminer si une personne a produit des anticorps en réponse au virus, qu’elle ait été symptomatique ou non lors de son infection.
Une analyse des performances du test immuno-chromatographique (Lab On Time) pour la recherche simultanée des IgG et des IgM vis-à-vis du COVID-19 a été réalisée en comparaison avec 2 tests ELISA (EuroImmun), l’un pour la détection des anticorps IgG et l’autre pour des IgA vis-à-vis du COVID19.
Cette étude a pour but d’apprécier la sensibilité et spécificité du test « Lab On Time » ainsi qu’étudier la cinétique de détection des anticorps au décours d’une infection à COVID-19. L’intérêt de l’utilisation des sérologies comme aide potentielle au diagnostic durant la phase aigüe chez des patients avec une PCR négative a également été évalué.
Matériel et méthodes
Afin d’évaluer la sensibilité, nous avons utilisés 114 fractions résiduelles de sérum ou de plasma issues de 61 patients. Pour chacun de ces patients, l’infection au COVID-19 a été confirmée par PCR.
En ce qui concerne les patients symptomatiques, les échantillons ont été classés en fonction du délai entre l’apparition des symptômes et la prise de sang.
En ce qui concerne les patients asymptomatiques, le délai considéré est celui entre le résultat de la PCR sur frottis nasopharyngé démontrant l’infection à COVID-19 et la prise de sang.
Les échantillons ont été classés en 4 groupes :
- Groupe 1 (0 à 7 jours : n=26)
- Groupe 2 (de 8 à 13 jours : n=25)
- Groupe 3 (de 14 à 20 jours : n=52)
- Groupe 4 (de 21 à 43 jours : n=11)
Afin d’évaluer la spécificité, 48 fractions résiduelles de sérum recueillies avant le développement de l’infection à COVID en Belgique ont été testées. Parmi ceux-ci, on retrouve 20 sérums de patients ayant présentés une infection à Influenza et prélevés avant février 2020, 11 sérums présentant une interférence potentielle et prélevés avant janvier 2020 (infection à CMV ou positivité de la sérologie auto-immune) et 17 sérums issus de patients prélevés avant septembre 2019 (14/17 étant des sérums de patients dialysés).
Enfin, 17 fractions résiduelles issues de 10 patients présentant une clinique et un résultat CT-Scan pouvant évoquer une infection à COVID-19, mais pour lesquels la PCR COVID était négative ou douteuse ont été également testés.
Les tests ont été réalisés selon les recommandations des fabricants. Le cut-off utilisé pour Elisa est celui préconisé par EuroImmun (négatif si ratio <0.8, positif si ratio >=1.1 et douteux entre ces 2 valeurs). La lecture du test immuno-chromatographique de « Lab On Time » a été réalisée indépendamment par 2 personnes et conformément aux indications du fabricant.
Résultats :
Les résultats obtenus sont présentés à l’annexe 1
Sensibilité et spécificité
Après 22 jours, tous les patients présentent des IgG positives dans les 2 tests.
Concordance entre les tests IgG/IgG et IgA/IgM
La concordance entre les 2 tests IgG, c’est-à-dire la proportion de résultats identiques toutes populations confondues (patients et contrôles) est de 91.3 %. Dans 6.2 % des cas, les divergences concernent un résultat d’IgG douteux/positif pour « Lab On time » et négatif pour EuroImmun et à l’inverse dans 2.5 % des cas, IgG douteux/positif pour EuroImmun et négatif pour « Lab On Time »
Pour les IgA et les IgM, seuls 88 sérums ont été testés à la fois par le test Immuno-chromatographique (IgM) et par Elisa (IgA) . La concordance est de 78.4 %. Dans 18.2 % des cas , on note IgM négatif et IgA douteux/positif et dans 3.4 % des cas, IgM douteux/positif et IgA négatif.
Cinétique des anticorps
Pour 23 patients, plusieurs échantillons séquentiels ont été testés afin d’évaluer la cinétique d’apparition des anticorps IgG COVID19.
Les IgG apparaissent précocement, déjà entre J0 et J7 (EuroImmun : 2/23 et Lab On Time : 3/23) et se positivent essentiellement entre J8-J13 (EuroImmun : 9/23 et Lab On Time : 10/23) et J14-J20 (EuroImmun : 9/23 et Lab On Time : 7/23). Après 21 jours, tous les patients sont positifs en IgG COVID19 dans les 2 techniques.
Intérêt de la sérologie en phase aigüe en complément de la PCR et/ou du CT-Scan ?
Nous sommes repartis de la cohorte des patients possiblement infectés (clinique suggestive/CT-SCAN compatible) mais avec une PCR négative ou douteuse au frottis. Parmi ces 10 patients, le test immuno-chromatographique Lab One Time a été réalisé sur un sérum prélevé de 6 jours minimum à 32 jours après le frottis nasopharyngé.
3/10 patients présentent alors une sérologie positive malgré une PCR négative ou douteuse.
La sérologie est négative au moment du frottis (J0) et positive à J6 (IgG positif/IgM négatif) pour l’un et est négative à J0 et toujours négative à J7 pour le second.
Pour 1 seul cas, la sérologie était déjà positive le jour du frottis (IgG positif/IgM faiblement positif), en faveur donc d’une infection à COVID.
Conclusions
L’évaluation du test « Lab On time » a démontré des performances comparables à celles du test Elisa de chez EuroImmun pour la recherche des IgG anti-Sars Cov2. Les IgG sont détectées précocement, avec une sensibilité atteignant déjà 60 % entre J8 et J13 post-symptômes, la sensibilité atteignant 86.5 % entre J14 et J20 et 100% après J22. La spécificité du test est de 97.9 % pour les IgG et 95.1 % pour les IgM.
La manipulation est simple (l’utilisation de la pipette inclue dans le kit n’a pas été testée). La lecture des résultats est aisée pour les IgG mais plus sujette à discussion pour les IgM, car de très faibles bandes peuvent être interprétées différemment selon le lecteur.
Annexe 1
Résultats obtenus avec le test Lab On Time et l’Elisa EuroImmun chez les patients positifs pour le COVID19
Résultats obtenus avec le test Lab On Time et l’Elisa EuroImmun dans la population contrôle
Réactifs utilisés
Test Immuno-chromatographique Lab On Time: lot NCP20030123
IgG anti SARS-CoV2 (EuroImmun): lot E000414BG et E000428BX
IgA anti SARS-CoV2 (EuroImmun): lot E000417AD